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    Implen小課堂:樣品吸光值和OD值有什么區(qū)別?

    在使用超微量分光光度計測量樣品時,結(jié)果通常以吸光值顯示,并轉(zhuǎn)換為濃度結(jié)果。而在一些使用場景下,客戶習(xí)慣或需要用OD值表述結(jié)果,這兩個物理量看似是一樣的,都是對

    物質(zhì)吸光能力和吸光度的表征,但嚴(yán)格來講卻有一定的區(qū)別。


    先說核心關(guān)系:

    吸光值 (Absorbance, A) ? OD值 (Optical Density, OD)

    您可以簡單的理解為:所有的OD值都是吸光值,但并非所有的吸光值都叫OD值。


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    吸光值的定義


    定義: 根據(jù)朗伯-比爾定律,吸光值是一個無量綱的物理量,表示溶液對特定波長光的吸收程度。

    計算公式: A = -log??(I / I?)

    吸光值與特定波長相關(guān)聯(lián)。例如,在260nm處的吸光值表述為A???。吸光值的應(yīng)用非常廣泛: 用于測量清澈、均勻的溶液中某種特定溶質(zhì)的濃度。例如:測量DNA/RNA濃度(A???);測量蛋白質(zhì)濃度A???或各種標(biāo)準(zhǔn)曲線比色法;測量化學(xué)反應(yīng)的進程,其理論基礎(chǔ)是溶質(zhì)分子對光子的吸收,以及由于非吸收導(dǎo)致的光衰減,其中就包括顆粒物的散射,以及氣泡的折射等。所以吸光值包括兩部分:真實的“”光值和其他因素導(dǎo)致的光衰減,由于檢測器本身無法進行區(qū)分,都會顯示為吸光值結(jié)果。但儀器通常具備背景校正功能,可以對結(jié)果中的非吸收因素進行一定程度的校正(可參考 320?340?核酸蛋白定量中背景校正的作用和選擇)。



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    OD值的定義



    定義: OD值是吸光值的一種,通常用來衡量渾濁樣品(如細(xì)菌細(xì)胞懸浮液、酵母培養(yǎng)液、顆粒物)對光的衰減程度。

    計算公式: 公式與吸光值完全相同:OD = -log??(I / I?)


    光的衰減機制: 在渾濁液中,光的減弱主要不是由分子吸收引起的,而是由散射引起的。細(xì)胞或顆粒將入射光向各個方向散射,導(dǎo)致探測器接收到的非散射光(透射光)強度減弱。OD值表述在微生物學(xué)中是常用的,OD600幾乎成為一個標(biāo)準(zhǔn)。選擇600nm是因為這個波長的光不會被培養(yǎng)基中的常見組分(如LB培養(yǎng)基)顯著吸收,且對微生物的傷害較小。一些特殊的培養(yǎng)物也可用OD550、OD650等測量。而其他一些應(yīng)用,如對顆粒物的散射表征也使用OD450等,具體方法學(xué)的建立可參考文獻會進行方法學(xué)開發(fā)。


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    為什么在表述中經(jīng)常混用?


    1. 測量儀器相同: 兩者都是用分光光度計等儀器來測量的。

    2. 計算公式相同: 儀器內(nèi)部都是使用-log(I/I?) 這個公式來計算并顯示讀數(shù)。

    3.歷史習(xí)慣: 例如在微生物學(xué)領(lǐng)域,人們已經(jīng)習(xí)慣了使用“OD”這個詞,即使儀器屏幕上顯示的是“Abs”,大家也心照不宣地稱之為“OD值”。



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        當(dāng)您測量的是澄清的溶液,并想知道其中某種溶質(zhì)的濃度時,您測得的是吸光值。當(dāng)您測量的是渾濁的細(xì)菌或細(xì)胞培養(yǎng)液、顆粒物懸濁液,并想估算細(xì)胞或顆粒物密度時,您測得的是OD值。雖然在日常對話中混用可能不會引起誤解,但在嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)寫作、報告或?qū)嶒炗涗浿?,使用?zhǔn)確的術(shù)語是非常重要的。

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